Взятие материала для исследований и его хранение
При вскрытии далеко не всегда удается определить причину смерти животного. Нередко высказывается только предположение на какое-нибудь заболевание требующее подтверждения при помощи лабораторных исследований — бактериологического, гистологического или химического.
Простейшие исследования вскрывающий может провести сам, если имеется соответствующее оборудование, но чаще всего материал для исследования отправляют в межрайонную, областную ветлабораторию или в институты.
Для лабораторного исследования важно правильно взять и законсервировать материал или направить его для исследования в свежем виде. Для бактериологического исследования берут материал, когда имеется подозрение на инфекционные заболевания, причем материал берется и посылается в зависимости от предполагаемого заболевания. Например, при подозрении на заболевание сепсисом для бактериологического исследования посылают селезенку, не вскрытое сердце и предполагаемый источник сепсиса (очаг поражения).
Для исследования на сибирскую язву от невскрытых трупов посылают ушную раковину или в крайнем случае мазки крови, от вскрытых трупов — селезенку и при карбункулезной форме — место поражения.
На рожу свиней — трубчатую кость, селезенку, почку.
На бруцеллез — абортированный плод, плодовые оболочки, кровь, молоко.
На паратиф — печень с желчным пузырем, мезентериальные лимфатические узлы, селезенку.
На паратуберкулез — подвздошную кишку с содержимым и прилегающие к ней лимфатические узлы.
На туберкулез, сап, бластомикоз посылаются части органов с очагами поражения.
Для исследования на болезнь ауески посылают головной мозг, селезенку, легкие.
На лептоспироз — кровь, мочу, печень, почки.
На бешенство — головной мозг.
Материал для бактериологического исследования берется стерильно в стерильную посуду и посылается в свежем виде в лабораторию с нарочным. Целые трупы или органы отправляются для исследования в стеклянных банках, металлических ведрах или баках с крышками. В крайнем случае можно заворачивать в непромокаемую ткань и упаковывать в ящики. Ни в коем случае не следует пересылать материал завернутым в газетную бумагу, мешок и т. п., во избежание разноса инфекции. В случаях, когда из-за дальности расстояния -в свежем виде материал доставить невозможно, его консервируют в 30% водном растворе глицерина.
Для гистологического исследования берут небольшие пластинки толщиной около 0,5 см. Рекомендуется пластинку ткани вырезать таким образом, чтобы в ней была как измененная ткань, так и нормальная. Материал фиксируют в 10% водном растворе формалина (см. гистологическая техника). В ряде случаев для гистологического исследования посылают те же органы, что для бактериологического — в свежем виде. Например, при подозрении на сап, туберкулез, бластомикоз, актиномикоз, оспу посылают части пораженных органов. Для гистологического исследования на паратуберкулез посылают отрезок подвздошной кишки и прилегающий к нему лимфатический узел.
В случаях, когда макроскопических изменений незаметно, для исследования посылают кусочки тех органов, в которых гистологические изменения обнаруживаются чаще. Например, при подозрении на инфекционную анемию лошадей посылают кусочки из печени, почек, селезенки сердца и легких. На инфекционный энцефаломиелит лошадей посылают кусочки печени. На бешенство — аммоновы рога и мозжечок. На болезнь Ауески — продолговатый мозг. На перипневмонию — легкие и т. д.
Для химического исследования материал посылают, когда имеется подозрение на отравление. Для этого необходимо иметь не менее двух литровых стеклянных банок. В одну банку берут содержимое желудка и петлю тонкого отдела кишечника с содержимым. Во вторую — кусок печени и почку. Эти органы посылают для исследования, руководствуясь следующими соображениями: если яд всосался из кишечника, он может задержаться в печени или выделяться из организма почками. Поэтому концентрация яда в этих органах должна быть выше, чем в других.
Вместе с материалом обязательно посылается сопроводительная бумага, в которой указывается, от какого животного взят материал, какие наблюдались признаки болезни, что обнаружено при вскрытии и подозреваемое заболевание или прилагается протокол вскрытия.
В ряде случаев органы после вскрытия необходимо сохранить как наглядное пособие в учебных случаях и как вещественное доказательство в судебных. Незначительный промежуток времени их можно сохранять в холодильнике. При необходимости длительного хранения органы или их части фиксируют в солевом растворе формалина (1-я жидкость) от 3 до 15 дней в зависимости от толщины куска. После фиксации тщательно промывают в проточной воде и помещают на несколько часов в ректифицированный, в крайнем случае денатурированный спирт (2-я жидкость) для восстановления цвета. Из спирта ткань переносят в 3-ю жидкость, представляющую собой раствор с глицерином. В этой жидкости препарат может сохраняться многие годы.
Рецептов жидкостей, пригодных для изготовления и длительного хранения патологического материала — музейных препаратов, много. Наиболее употребительные из них следующие.
I. Н. Ф. Мельникова — Разведенкова. 1-я жидкость продажного формалина 100 мл, хлористого калия 5 г, уксуснокислого калия (натрия) 30 г, воды 100Q мл; 2-я жидкость — чистый этиловый спирт 96°; 3-я жидкость — глицерина 600 мл, уксуснокислого калия (натрия) 400 г, воды 1000 мл.
Уксуснокислый калий .следует предпочесть уксуснокислому натрию.
II. Кайзерлинга. 1-я жидкость — формалина 200 мл, азотнокислого калия (селитры) 15 г, уксуснокислого калия (натрия) 30 г, воды 1000 мл; 2-я жидкость — спирт 80—90°; 3-я жидкость — глицерина 200 мл, уксуснокислого калия (натрия) 100—200 г, воды 1000 мл.
III. Пика. 1-я жидкость — формалин 70 г, искусственная карлсбадская соль 50 г, воды дистиллированной 1000 мл; 2-я жидкость — спирт 80—90°; 3-я жидкость — уксуснокислый натрий 270 г, глицерин 540 мл, дистиллированной воды 900 мл. Во избежание появления плесени рекомендуется прибавить несколько кристаллов тимола.
Для сохранения цвета препарата материал может быть обработан газом — окисью углерода. Для этого свежий нефиксированный препарат помещается (подвешивается) в специально приготовленную небольшую камеру или плотно закрытую стеклянную банку, куда впускается газ. При выдерживании его в атмосфере, насыщенной газом в течение 30 минут — 3 часов, гемоглобин переходит в карбоксилгемоглобин, прочное соединение, которое в дальнейшем при фиксации не разрушается, и препарат долго не теряет своей окраски. После этого препарат опускают в солевую формалиновую смесь (1-я жидкость) на срок, достаточный для его фиксации. Затем, после промывки в воде, помещают в глицериновую смесь (3-я жидкость), где он и сохраняется.
Кроме приведенных трехфазных методов фиксации и сохранения материала, основанных на восстанавливающей способности спирта, существуют и другие способы, при которых восстановление цвета достигается без применения спирта. Наиболее приемлемым из них является хлоралгидратный метод, предложенный Иоресом. Автор рекомендует употреблять формалиново-солевой раствор Пика с хлоралгидратом. В частности, к одному литру раствора Пика прибавляют 50 мл насыщенного раствора хлоралгидрата, при этом образуются стойкие соединения гемоглобина, приближающиеся по цвету к оксигемоглобину.
Готовый препарат помещают в стеклянную банку (лучше четырехугольную), прикрепляют нитками на специально прирезанное стекло, заливают третьей жидкостью, количество ее должно превышать объем препарата, закрывают стеклянной крышкой, которую приклеивают при помощи замазки.