Приготовление гистологических срезов
Общие сведения. Для изготовления гистологических срезов фиксированная ткань нуждается в дополнительном уплотнении. Для этого существует несколько методов: замораживание ткани, пропитывание ее целлоидином, парафином и другие способы.
Рис. 157. Общий вид замораживающего микротома.
1— шланг для подачи углекислоты, 2 — столик, 3 — нож.
После фиксации и уплотнения ткани тем или иным способом приготовляются срезы. Для получения тонких срезов одинаковой толщины, годных для микроскопического исследования, пользуются особыми аппаратами — микротомами. Их существует несколько типов. Наиболее употребительными являются замораживающие и санные микротомы (рис. 157). Принцип устройства их состоит в том, что после каждого среза столик, к которому прикреплена исследуемая ткань, поднимается на заданную высоту. Таким образом, срезы получаются одинаковой толщины. Срез должен быть достаточно тонким и прозрачным, обычно изготовляют срезы толщиной от 4 до 15 мкм.
Замораживание ткани. Замораживание ткани при изготовлении гистологических препаратов производится на замораживающем микротоме с применением жидкой, углекислоты, эфира, хлор-этилена или электрическим током на столике из полупроводников.
При помощи замораживания удается быстро изготовить гистологические препараты. Этот метод используется также при исследовании на жир и жиросодержащие вещества в тканях, поскольку жиры растворяются в спиртах, ксилоле и ацетоне.
Заливка ткани в целлоидин. Для заливки в целлоидин вырезают кусочки ткани толщиной 1—3 мм и последовательно проводят через спирты возрастающей крепости — 50°, 75, 95 и 100°, выдерживая по 24 часа в каждом. Через 100° спирт кусочки ткани рекомендуется проводить дважды, выдерживая по 24 часа в каждом случае. Затем кусочки ткани переносят в смесь равных частей абсолютного (100°) спирта и эфира также на 24 часа. После этого кусочки ткани помещают вначале в жидкий 2%, а потом густой 8% целлоидин на 2—3 дня в каждый.
Целлоидин готовят из кино- или фотопленки. Вначале ее отмывают от желатины в горячей воде, затем просушивают, мелко нарезают и растворяют в смеси из равных частей спирта и эфира. 2 % раствор целлоидина по консистенции сходен с жидким коллодием, а 8 % напоминает густой сироп. После выдержки в густом целлоидине материал заливают этим же целлоидином в чашечке под колпаком, где он уплотняется в течение 12—24 часов. Когда целлоидин приобретает плотность эластичной резины, вырезают блоки и наклеивают их целлоидином на квадратные деревянные кубики. Можно заливать кусочки ткани целлоидином непосредственно на кубиках. Блоки необходимо маркировать, для чего на одной из боковых поверхностей кубика делают тушью соответствующее обозначение. Обычно пишут № исследования.
Заливка ткани в парафин. Обезвоживание ткани производят в спиртах восходящей крепости в том же порядке, как и при целлоидиновой проводке. После 100° спирта кусочки исследуемой ткани переносят в смесь равных частей абсолютного спирта и ксилола на 2—3 часа. Затем материал заливают чистым ксилолом и выдерживают в течение 2—3 часов. По истечении срока его переносят в новый чистый ксилол на 2—3 часа, потом в парафинксилол (насыщенный раствор парафина в ксилоле при 30°) на 1—1,5 часа. После этого материал помещают в чистый парафин при температуре 54—56° на 1,5—2 часа. Затем заливают материал парафином в бумажные или металлические формочки и охлаждают в воде. Так же как и целлоидиновые блоки, их наклеивают на деревянные кубики и маркируют.