Болезни крупного рогатого скота

Subscribe

Окрашивание срезов

ГЛАВА: ТЕХНИКА ИЗГОТОВЛЕНИЯ ГИСТОЛОГИЧЕСКИХ ПРЕПАРАТОВ

Общие сведения. Окраска гистологических срезов основана на неодинаковом сродстве тканевых элементов к определенным красителям. Ядра клеток более способны окрашиваться основными, протоплазма — кислыми красками. Соответственно этому различают основные, или ядерные, и кислые, или диффузные, краски. Наиболее часто в обычной ветеринарной патологоанатомической практике применяются окраски срезов гематоксилин-эозином по Ван-Гизон, по Перлсу, Суданом III и др.

Окраска гематоксилин-эозином. Окрашивание ведется в маленьких чашках Петри или на стеклах. Этот метод применяется для окраски срезов, приготовленных любым способом. При этом ядра клеток приобретают фиолетово-синий или густо-синий цвет. Протоплазма и волокнистое вещество приобретают светло-синий или розово-красный цвет. Жиры и липоиды не окрашиваются. Эритроциты млекопитающих, поскольку они ядер не содержат, окрашиваются только эозином.
Окраска   в   чашках производится   следующим образом.
1.    Срез переносят препаровальной иглой из воды в раствор гематоксилина   на   2—5   минут.
2.    Промывают   в   воде   2—5   минут.
3.    Погружают на 10—2(1 секунд в 1 % раствор соляной кислоты на 70° спирте (если срез сильно перекрашен гематоксилином, его следует держать  в  этом  растворе  несколько дольше).
4.    Промывают   в   чистой   воде   5—10   минут.
5.    Промывают в слабощелочном растворе (в баночку с водой прибавляют   1—2   капли   нашатырного   спирта)   10   минут.
6.    Промывают снова чистой водой в течение 10—15 минут. Если срез после щелочной воды недостаточно промыт, он плохо окрашивается   эозином.
7.    Окрашивают   эозином   в   течение   3—5   минут.
8.    Промывают в течение    1—2   минут   водой.
9.    Обезвоживают в спиртах восходящей крепости — 75, 90, 100°. Если срез перекрашен эозином, его следует несколько дольше держать   в   75°   спирте.
10.    Просветляют   в   карболксилоле.
11.    При помощи шпателя и иголки срез переносят на предметное    стекло.
12.    Высушивают   фильтровальной   бумагой.
13.    На срез наносят каплю пихтового бальзама и накрывают покровным   стеклом.

Окраска по Ван-Гизон.
Окраска по Ван-Гизон дает неодинаковый цвет различных тканей. Соединительная ткань красится в ярко-красный цвет, остальные ткани — в желтый или серовато-желтый. Ядра окрашиваются в черный или темно-фиолетовый цвет.
Окраска   производится   следующим   образом.
1.    Срезы интенсивно окрашивают гематоксилином (лучше гематоксилин   Вейгерта)   и   споласкивают   в   воде.
2.    Сразу переносят в пикрофуксин на 3—5 минут (смесь насыщенного водного раствора пикриновой кислоты — 150,0 и насыщенного   водного   раствора   кислого   фуксина — 3,0—5,0).
3.    Быстро промывают в воде (вода извлекает из среза фуксин).
4.    Обезвоживают 95° спиртом   1—2 минуты.
5.    Просветляют в карболксилоле и заключают в пихтовый бальзам,    как   при   окраске   гематоксилин-эозином.

Окраска Суданом III.

Судан III — нейтральная азокраска, растворимая в спирте, ацетоне и жирах, не растворимая в воде. Окраску Суданом III производят для определения в срезах жиров и липоидов.    Техника   окраски    следующая.
1.    Замороженные срезы переносят из воды на 0,5—1,0 минуту
в   50°   спирт.
2.    Срезы помещают в свёжефильтрованный раствор Судана
на    10—20   минут.
3.    Споласкивают 50° спиртом  в течение 0,5—1,0  минуты.
4.    Тщательно    промывают   водой   в   течение    10—15     минут.
5.    Срезы подкрашивают квасцовым гематоксилином Эрлиха или   Бемера.
6.    Промывают водой в течение 3—5 минут. Перекрашенные в гематоксилине срезы дифференцируют в 1 % водном растворе соляной кислоты, споласкивают подщелоченной водой, затем чистой водой.
7.    Заключают в   глицерин   или   глицерин-желатину.
8.    Накрывают   покровным   стеклом.

Окраска по Перлсу.
При некоторых заболеваниях, сопровождающихся усиленным распадом эритроцитов в кровяном русле (гемоспоридиозы, инфекционная анемия лошадей и некоторые другие) наблюдается появление железосодержащего пигмента — гемосидерина — в органах, где он обычно не встречается. Для выявления его применяется реакция на берлинскую лазурь (по Перлсу).

Техника   окраски   следующая.
1.    Срезы из дистиллированной воды переносят стеклянными иглами в свежеприготовленную смесь, состоящую из 2% раствора желтой кровяной соли — 1 часть, и 1 % водного раствора соляной кислоты — 1,5 части на 15—20 минут.
2.    Промывают дистиллированной водой в течение 5—10 минут.
3.    Докрашивают   квасцовым   кармином   15—20   минут.
4.    Ополаскивают в воде и проводят через спирты, карболксилол и   бальзам.
Железосодержащий пигмент — гемосидерин — приобретает синевато-зеленоватый    или    голубоватый    цвет.

Окраска по Туревичу.
По способу Туревича окрашивают срезы, изготовленные из мозга, для диагностики бешенства.
При этом тельца Негри и эритроциты окрашиваются фуксином в   красный   цвет,   нервные  клетки   гематоксилином — в  синий.
Для гистологического исследования берут кусочки аммонова рога и мозжечка, фиксируют их в 10% формалине, ацетоне или жидкости Адуцкевича следующего состава: 80% уксусной кислоты — 1 часть, хлороформа — 2 части, 96° этилового спирта — 6 частей.
Продолжительность фиксации при комнатной температуре в формалине 1 сутки, в ацетоне и жидкости Адуцкевича— 3—6 часов. После фиксации вырезают кусочки толщиной не более 1—1,5 мм,
заливают   в парафин,   после чего готовят гистологические срезы, высушивают   и   окрашивают.

Окраска   по   Туревичу   производится   следующим   образом.
1.    Срезы перед  окраской депарафинируют в  ксилоле 10—20
минут.
2.    Смывают   спиртом.
3.    Окрашивают ядра клеток гематоксилином Вейгерта в течение 2 минут.
4.    Срезы   промывают   водой.
5.    Дополнительно окрашивают 1% раствором кислого фуксина в течение 1 минуты.
6.    Промывают   водой
7.    Дифференцируют в смеси 95° спирта и насыщенного водного раствора пикриновой кислоты в течение 10—20 секунд до ясно-желтого оттенка.
8.    Высушивают   фильтровальной    бумагой.
9.    Обезвоживают   абсолютным   спиртом.
10.    Просветляют   в   ксилоле   в   течение 1    минуты.
11.    Заключают в канадский, или пихтовый, бальзам.