Болезни скота | Фиксация материала

Болезни крупного рогатого скота

Subscribe

Фиксация материала

ГЛАВА: ТЕХНИКА ИЗГОТОВЛЕНИЯ ГИСТОЛОГИЧЕСКИХ ПРЕПАРАТОВ

Изготовление гистологических препаратов включает: 1) фиксацию материала; 2) приготовление гистологических срезов; 3) окрашивание срезов.

Общие сведения. Сущность фиксации заключается в том, чтобы сохранить взятые кусочки органов и тканей от гниения и ферментативных процессов.
При фиксации ткани претерпевают ряд физико-химических изменений, существенным из которых является быстрое свертывание белков и отчасти липоидов и переход их в такое состояние, при котором они не изменяются от длительного хранения и во время последующих обработок.
Фиксация производится в жидкостях различного состава. Наиболее употребляемыми являются: формалин, спирт, реже ацетон, сулема и др.

Фиксация формалином. Продажный формалин (40% водный раствор формальдегида) применяется в 10%, 15% растворе (10,0—15,0 продажного формалина на 90,0—85,0 воды). Указанная концентрация сравнительно быстро (48—72 час.) пропитывает ткань и хорошо фиксирует ее. Нельзя фиксировать материал формалином высокой концентрации или в неразведенном продажном формалине. В этом случае поверхностные слои ткани очень быстро уплотняются и образуют корочку, которая препятствует проникновению фиксирующей жидкости вглубь, где процессы аутолиза могут продолжаться.
В связи с тем, что в формалине всегда содержится какое-то количество муравьиной кислоты, которая может оказать отрицательное воздействие на ткань и помешать некоторым методам дальнейшей обработки материала (серебрение и др.), его следует нейтрализовать мелом. На 100 г продажного формалина (40% формальдегида) прибавляется 10 г мела. Содержимое несколько раз взбалтывают, затем дают отстояться и мел оседает на дно посуды. Следует также иметь в виду, что при хранении формалина в холодном помещении формальдегид способен к полимеризации и выпадению из крепких растворов в виде белых осадков. В целях предупреждения этого рекомендуют хранить формалин в теплом помещении и темной посуде.
Кусочки ткани, взятые для гистологического исследования, не должны быть толще 0,5 см и не должны плотно прилегать к стенкам банки, для этого их кладут на вату или фильтровальную бумагу. Объем фиксирующей жидкости должен превышать примерно в 10 раз объем взятого материала. Фиксация формалином недопустима в тех случаях, когда в исследуемой ткани желательно обнаружить    вещества,   растворимые в воде, например гликоген.

В случаях, когда требуется быстрое исследование, фиксацию кусочков ткани проводят в формалине, нагретом до 85—90°. Продолжительность фиксации кусочков толщиной 2—3 мм при такой температуре 10—15 минут. При длительном хранении материала в формалине в тканях образуются темно-бурые осадки, которые загрязняют препараты. Для удаления осадков рекомендуется опускать гистологические срезы в 2—3% раствор перекиси водорода, 1% раствор едкого калия и др., затем несколько раз промыть водой.

Фиксация спиртом. Этот метод целесообразен только в тех случаях, когда необходимо зафиксировать в тканях вещества, растворимые в воде и водных растворах других фиксаторов. Для фиксации применяется спирт 95 или 100°. Спирт, извлекая воду из кусочков ткани, сам разбавляется и делается менее крепким. Поэтому рекомендуется менять спирт несколько раз.